阿托伐他汀在实验性变态反应性脑脊髓炎中的治疗作用研究

多发性硬化症(multiplesclerosis，MS)是一种病因不明的、以中枢神经系统脱髓鞘为特征的免疫性疾病。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephal0myelitis，EAE)具有与人类MS极为相似的临床、生化、免疫及病理特征，是研究人类MS理想的动物模型。他汀类药物在动脉粥样硬化、类风湿性关节炎和系统性自身免疫疾病中有免疫调节作用和抗炎作用已明确，MS／EAE作为一种中枢神经系统免疫性疾病．其致病机制主要与免疫炎性有关，本研究的目的在于探讨阿托伐他汀在EAE中能否发挥抗免疫炎性反应来达到治疗的效果。

研究通过动物雌性sD大鼠48只建立EAE模型，在EAE模型实验研究的结果得出以下报告：

1动物临床症状的改变

1．1阿托伐他汀对EAE临床过程的影响阿托他汀可以减轻临床症状，减少临床持续时间，减慢复发时间
1．2阿托伐他汀对EAE大鼠发病严重程度的作用结果表明阿托伐他汀可减轻大鼠发病的严重程度。
1．3阿托伐他汀对EAE大鼠发病进展速度的影响结果显示阿托伐他汀有延缓EAE进展的倾向，但未达到显著性
1．4阿托伐他汀对EAE大鼠复发率、缓解率及死亡率的影响在观察期6Od内大鼠可有三种情况：死亡、不完全缓解、完全缓解不再有体征。治疗组的完全缓解率、不完全缓解率与EAE组相比，均有统计学意义(JD<0．05)。结果表明阿托伐他汀可以提高EAE大鼠的完全缓解率和不完全缓解率．

2：组织病理学表现正常组(PBS)的病理检查未见异常．与临床符合。治疗组大鼠中枢神经系统内的组织病理改变与EAE组相比，病理变化的形式相同，但均有不同程度减轻，如病灶的炎性侵润细胞数、“血管套”及脱髓鞘改变，治疗组明显少于EAE组，但两个治疗组之间相比较无明显差异(P>0．05)。

3：小胶质细胞的免疫组织化学染色结果与正常组比较，EAE组大鼠脑白质中GSI．B4阳性细胞数差异有极显著性(P<0．01)；与EAE组比较，治疗组大鼠脑白质中GSI—B4阳性细胞数差异均有显著性(P<0．05)(图4)，但两个治疗组之间相比较无明显差异

4：各组大鼠脑组织中TNF．0阳性细胞数的比较免疫组化染色显示TNF．阳性细胞胞体均较小．呈卵圆形、梭性或三角形。胞浆浓染，突起较少，大多为小胶质细胞，高峰期TNF．阳性细胞明显增多。治疗组大鼠脑组织中TNF．的阳性细胞数在高峰期和EAE组相比，有统计学意义(P<0．05)。但两个治疗组之间相比较无明显差异(P>0．05)。

5：各组大鼠外周血中TNF含量的比较治疗组外周血中TNF．0含量明显低于EAE组，有统计学意义(P<0．05)。但两个治疗组之间相比较无明显差异(P>0．05)。

讨论：MS是一种病因不明的、以中枢神经系统脱髓鞘为特征、特异性T细胞介导的器官特异性自身免疫病。他汀类药物最初是作为有效而安全的降脂药应用于临床，1995年发现其具有免疫调节作用。近年来一系列的动物实验和人类免疫细胞的体外实验都证明他汀类药物具有免疫调节功能和抗炎作用，有的作者甚至认为他汀类药的免疫调节作用可与IFN．B相媲美，本研究也发现给予阿托伐他汀治疗后其平均临床评分、组织学评分均有明显的下降，模型鼠的临床症状也较发病前好转。

阿托伐他汀对EAE中小胶质细胞的影响本研究结果发现在EAE模型脑组织中出现小胶质细胞的活化，不仅表现为形态的改变，还表现小胶质细胞数目的明显增多，处于静止的小胶质细胞主要表现为细小分枝状，GSI．B4阳性细胞均匀地分布在灰质和白质中，胞体小不易观察；当小胶质细胞激活达高峰，在病灶处，小胶质细胞高度聚集，形态多样，以阿米巴状多见，胞体明显增大。给予阿托伐他汀治疗后可见小胶质细胞胞体明显缩小，数目集聚分散．阳性细胞表达数下降达75％，推测阿托伐他汀对小胶质细胞的作用机制可能是：
(1)阿托伐他汀是HMG．CoA还原酶抑制剂，其结构与胆固醇合成过程中的限速酶HMG．CoA还原酶的天然底物HMG．CoA结构十分相似．故能与该酶的活性部位结合，成为其竞争性抑制剂，从而抑制体内胆固醇的生物合成。
(2)体外研究发现，采用阿托伐他汀处理小胶质细胞几乎可以完全抑制IFN．^y诱导的MHC—II表达，主要通过抑制CI一1TA转录而起作用。
(3)除此之外，本研究也发现，治疗组EAE大鼠脑组织中活化的小胶质细胞．特别是阿米巴形的反应性小胶质细胞的数量和密度均较EAE组低。具有统计学意义。结果提示阿托伐他汀在：EAE中能通过抑制小胶质细胞活性而达到改善EAE模型发病症状的作用，但不同剂量对治疗作用并无明显差异。

阿托伐他汀对EAE中炎性细胞因子的影响EAE主要由Thl类细胞介导，分泌促炎症性细胞因子如IL一2、IFN一^y、和TNF—Ot等Thl类细胞反应与。MS的临床活动性密切相关，在多种动物均发现在急性期和复发期Thl类反应均上调，而缓解期正常。Th2类细胞反应分泌IL．4、IL一8、IL10和IL一13可以下调EAE的疾病活动。已有研究证明[9]他汀类药物可以调节Th1／Th2细胞平衡，并促使T细胞最终倾向Th2细胞增殖，并抑制Thl细胞增殖。本研究分别进行了定性和定量的检测都发现在EAE模型脑组织中TNF．的表达增多，研究证实在EAE中阿托伐他汀不仅可抑制TNFOt的表达，还可降低TNFOt在一EAE血中含量。它们的阳性抑制率分别为68．25％和73．81％．有统计学意义。猜测阿托伐他汀可以调节Thl／Th2细胞平衡，并促使T细胞最终倾向Th2细胞增殖．并抑制Thl细胞增殖。

从其抗炎作用研究可见他汀类药物主要在MS的早期针对T细胞激活和迁移起作用。对Th细胞反％应的调节作用也主要在急性发作期和复发期较明显。持续的免疫反应可造成轴索直接被炎性因子损害以及脱髓鞘反应继发的轴索损害，造成临床上的功能障碍。因此使用阿托伐他汀治疗MS的研究应该在早期还没有明显的轴索变性发生前开始。但需注意到，胆固醇是神经系统髓鞘和突触形成、轴索再生所必需的原料，阿托伐他汀抑制胆固醇合成可能会阻碍MS病损的髓鞘再生和神经修复。而且，多种他汀类药物虽同属HMG—CoA还原酶抑制剂，但药理活性、免疫活性及药代动力学有所差异。所以，阿托伐他汀应用于MS的临床治疗，还要进行许多研究工作。此外，本研～究发现不同剂量的阿托伐他汀在EAE中发挥免疫调节作用是无统计学差异的，所以一些研究讨论的大剂量的阿托伐他汀对Ms治疗更有益有待于进一步研究，需慎重考虑其带来的毒副作用。

综上，阿托伐他汀在EAE中的确具有抗炎和免疫调节作用，能改善EAE模型的临床症状，其不仅可以发挥抑制小胶质细胞的表达，还可下调T淋巴细胞分泌的炎性细胞子。