神经生长因子（NGF）对急性颅脑损伤的保护作用

颅脑损伤后的病死率较高如何防治颅脑损伤后的继发性脑损伤是降低病死率的关键。近年来为了控制继发性脑损伤的发生．临床上采取了多种治疗方法。但降低病死率的效果并不明显。脑损伤后受损伤的中枢神经元虽不能再生，但随着时间延长却常出现有意义的功能恢复，大量研究表明神经生长因子(nervegrowthfoctor，NGF)与之有关，大鼠颅脑损伤后功能的恢复成为研究领域的重要课题,研究通过了建立大鼠颅脑损伤模型,观察大鼠急性脑颅脑损伤后神经病学评分和脑组织中一氧化氮合成酶(nitricoxidesynthetase，NOS)含量的变化，：一氧化氮(nitricoxide，NO)参与了颅脑损伤后脑缺血、缺氧继发性脑损伤的病理过程,探讨神经生长因子（NGF）对急性颅脑损伤后早期应用的神经保护机制。
1材料与方法
1．1实验动物雄性Wistar大鼠100只，体重250-300g，由山东大学实验动物中心提供。
1．2药品及试剂2．5s神经生长因子(解放军军事医学科学院提纯)，用0．9％NaCl溶液溶解后冷藏保存备用。胞磷胆碱钠(山东新华制药股份有限公司生产NOS测定试剂盒由南京建成生物工程所提供。
1．3实验方法
1．3．1动物分组：(1)先将造模成功的27只。随即分为3组，①NGF实验组：9只．后肢肌肉注射2．5sNGF，每次肌注1000BU，1次／d，连续20d。②胞磷胆碱钠(CS)药物对照组：9只，后肢肌肉注射CS，每次肌注0．1g，1次／d，连续20d；③盐水对照组：2ml生理盐水，肌注，1次，d，连续20d。以上3组首次用药均在术后24h之内进行。(2)再将造模成功的剩余的65只大鼠随机分为3组，即正常组(5只)，实验组、对照组各30只，实验组和对照组又分为脑损伤后lh、3h、6h、8h、24h5个小组，每组6只。实验组大鼠脑损伤后即刻肌肉注射神经生长因子1000BU(2ml生理盐水溶解)，对照组则注射等量生理盐水。
1．3．2模型制备：用20％氨基甲酸乙酯0．6ml／kg腹腔麻醉后固定于手术台上，在无菌条件下于矢状正中线切开头皮、骨膜，并分离骨膜。于左侧前囟后2mm、中线旁开2mm处，做一直径约4mm的骨窗，保持硬膜完整。将其置于自由落体实验平台底部，将40g重砝码沿25cm高处滑下．撞击于左侧顶骨窗之硬膜上。致伤面积约lcm2，致伤力lO00g／cm2，下陷深度约2mm。
1．3．3神经病学评分：分别于治疗前、后参照Longat~5分评分标准：0分，无神经症状；1分，不能完全伸展对侧前或后爪；2分。向外侧转圈；3分，向手术对侧倾倒：4分，不能自发行走，意识丧失。
1．3．4脑组织NOS测定：对照组和实验组大鼠分别在脑损伤后lh、3h、6h、8h、24h断头取脑，取创伤部位皮质及对侧相应区域组织约1．0—2．0c，立即称重．用玻璃匀浆器制成10％匀浆。以4000r／min离心15min．提取上清液．检测NOS水平。

1．4统计学分析实验所得数据用x±s表示，各组实验数据采用SPSS8．0软件进行统计学处理。

2:结果
2．1脑损伤大鼠神经病学评分的结果治疗后除盐水对照组外，其余两组评分均低于治疗前(P<0．05)，也低于盐水对照fll(P2．2:各组大鼠脑组织NOS含量变化的比较大鼠脑皮质中的NOS活性正常组为39．32±8．96，脑损伤后lh时较正常组升高(P<0．05)，6h开始下降。神经生长因子治疗组大鼠脑损伤后lh、3h、6hNOS活性较对照组明显降低(P<0．051。表明神经生长因子（NGF）能拮抗脑损伤后所致的NOS活性升高效应。

3讨论
目前研究证实．神经生长因子（NGF）对急性颅脑损伤的保护作用,能选择性地作用于中枢神经系统,。胎神经移植与神经生长因子联合注入应用于脑损伤SD大鼠皮质的研究表明。既可改善其活动功能，又可促进脑损伤的恢复。在正常生理状态下，外源性神经生长因子静滴或肌注后不易透过这一脑脊液屏障，但在急性脑损伤初期，因这一脑脊液屏障受损。神经生长因子可透过这一脑脊液屏障进入中枢神经系统而发挥作用。颅脑损伤后会导致脑细胞水肿、软化、变性，甚至萎缩、坏死，所以神经病学评分增高。经过神经生长因子治疗后，神经病学评分降低。与治疗前比较有显著性差异；盐水对照组神经病学评分与治疗前比较无显著性差异，表明神经生长因子对大鼠的神经功能恢复有促进作用。治疗后NGF组神经病学评分均低于盐水对照组，说明神经生长因子（NGF）对脑损伤的保护和治疗作用是确切的，这与有关报道是一致的.

创伤性脑损伤后NO增加已得到证实。而NO是近年来新发现的一种特殊的神经递质和自由基，具有“双重作用”。过量的NO则以自由基的形式对神经细胞产生毒性作用，颅脑损伤后NO大量增加，并且作用时间较长。NO是由NOS催化L一精氨酸氧化生成的；而参与神经损伤的NO来源于NOS阳性神经元，由于NO极不稳定，故对NO的认识多来源于对NOS的研究。实验发现，创伤性脑损伤后NOS表达的变化趋势与脑细胞凋亡的变化趋势基本吻合，结合增加的NOS阳性细胞的形态特征，可推断为诱导型NOS阳性细胞，而脑损伤后诱导型NOS阳性细胞过量的NO释放促发了细胞凋亡的发生

本实验结果显示，脑损伤后NOS活性增加与正常组比较有显著性差异0o<0．05)，提示NO和NOS参与了脑损伤后脑细胞损伤的病理过程，并随时间呈现一个动态的变化过程另外．损伤后脑组织中Nos的活性在一定时间内有阶段性升高的变化推测是脑损伤后引起谷氨酸释放增加，谷氨酸通N一甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体导致Ca内流增加，ca2结合钙调素后激活NOStl31。脑损伤后lh3h、6hNOS活性升高．经过神经生长因子治疗NO活性明显降低，与相应对照组比较，有显著性差异(P<0．05)，表明NGF能拮抗脑损伤后所致的NOS活性升高效应。NGF能够抑制脑损伤后兴奋性氨基酸的升高效应，从而间接抑制了兴奋性氨基酸作用于NMDA受体所致的Ca内流进而抑制Ca对NOS的激活，减少了NO的释放从而保护了神经细胞，这可能是NGF对脑损伤保护作用的机制之一。另外NGF还能增加过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等自由基清除剂的活性：对细胞内Ca的浓度也有很好的稳定作用。由此可见，NGF及早、足量的应用，对颅脑损伤后继发性脑损伤有较好的防治作用，能够达到治疗的目的。但是如何提高疗效，选择较好的给药途径尚需进一步研究。